Определение нафтохинонов в сырье и препарате ореха черного

Кандидат фармацевтических наук, биотехнолог, провизор. Стаж: 6 лет.

Дата публикации: 25.05.2022

Предложена методика количественного определения суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и установлено его содержание в листьях, околоплодниках черного ореха, сборе и БАД ВЕНОСПАС методом фотоэлектроколориметрии.

Ключевые слова: орех черный, нафтохиноны, юглон, содержание, фотоэлектроколориметрия.

Орех черный (Juglans nigra L., сем. Ореховые — Juglandaceae) — ценная древесная, декоративная и плодовая культура (родина растения — Северная Америка), один из наиболее перспективных интродуцентов Республики Адыгея, где существуют оптимальные почвенно-климатические условия для его произрастания [1,4].

Листья и плоды ореха черного приобретают все большее значение как лекарственное растительное сырье (ЛРС), содержащее нафтохиноны: юглон, гидроюглон и их гликозиды. Настойка черного ореха рекомендована при гельминтозах, микозах, кандидозах, ОРВИ, гриппе, псориазе, диабете, для лечения язв, гастритов и даже онкологических заболеваний [5].

На основе черного ореха разработан ряд биологически активных добавок (БАД) к пище: порошок околоплодника в капсулах, порошок листьев в таблетках, жидкий экстракт и др., предназначенные для профилактики гельминтозов [3].

Цель данной работы — разработка методик количественного определения суммы нафтохинонов и изучение их содержания в сырье и фитопрепаратах ореха черного.

Экспериментальная часть

Объектами исследования служили околоплодники и листья ореха черного, заготовленные в Республике Адыгея в 2011 г., высушенные до влажности не более 10 %; БАД ВЕНОСПАС, а также смесь ЛРС, используемая для получения БАД: каштана конского семена (30 %), лещины обыкновенной листья (30 %), винограда культурного семена (20 %), софоры японской бутоны (2 %) и плоды (8 %), ореха черного листья (5 %), ореха черного околоплодники (5 %) [2]. Методы исследования включали: экстракцию, окисление, гидролиз, фракционирование и фотоэлектро-колориметрию (ФЭК).

Пробоподготовка осуществлялась с учетом известных физико-химических свойств юглона и его производных. С целью снижения возможного влияния малополярных сопутствующих веществ в качестве экстрагента растительного сырья использовали спирт этиловый 20 %. Нафтохиноны, которые в сырье представлены восстановленными, конденсированными и гликозидированными производными, подвергались кислотному гидролизу и окислению в присутствии катионов железа (III). Далее нафтохиноновые агликоны селективно извлекались неполярным экстрагентом и переводились в спиртовой раствор.

Предварительный анализ показал, что растворы юглона и его производных, имеющие собственное окрашивание, целесообразно анализировать ФЭК-методом. Линейная зависимость оптической плотности раствора юглона наблюдается в диапазоне концентраций от 8 до 72 мкг/мл.

Методика определения суммы нафтохинонов в растительном сырье. Около 2,0 г (точная навеска) сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 2 мм, помещают в коническую колбу, прибавляют 100 мл 20 % спирта этилового и перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч. Затем смесь выдерживают в течение 15 мин и фильтруют через бумажный фильтр «красная лента», декантируя извлечение. Операцию повторяют еще 2 раза в тех же условиях. Объединенный фильтрат упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани 85–90 °С до объема около 50 мл. Остаток количественно с помощью 20 мл воды переносят в коническую колбу со шлифом, прибавляют 10 мл раствора железа (III) хлорида, 40 мл кислоты хлористоводородной разведенной (8,3 %) и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на фотоэлектроколориметре КФК-2 с синим светофильтром (440 нм) в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 96 % спирт этиловый. Если оптическая плотность превышает 0,8, испытуемый раствор разводят спиртом 96 % и вычисляют коэффициент разведения (К).

Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора Б, который готовится следующим образом. Около 0,01 г (точная навеска) стандартного образца юглона (5-Hydroxy-1,4-naphtoquinone) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 15 мл 96% спирта этилового, затем объем доводят тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А). 1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки 96% спиртом этиловым и перемешивают (раствор Б).

Содержание суммы нафтохинонов в пересчете на юглон и абсолютно сухое сырье (Х) в процентах рассчитывают по формуле:

x =

D × 25 × a₀ × 1 × K × 100

D₀ × a × 25 × 10

100

(100 - W)

Методика определения суммы нафтохинонов в БАД ВЕНОСПАС. Около 5,0 г (точная навеска) препарата помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл воды, 10 мл раствора железа (III) хлорида, 40 мл кислоты хлористоводородной 8,3 %, перемешивают, затем нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч.

Селективное извлечение анализируемой фракции. Смесь охлаждают, затем количественно с помощью 20 мл воды переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл и экстрагируют эфиром диэтиловым 5 раз порциями по 40 мл, каждый раз взбалтывая в течение 2 мин. Эфирные извлечения последовательно фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного в сухую термостойкую круглодонную колбу. Фильтрат упаривают при температуре 40 °С досуха, остаток растворяют в 15 мл 96 % спирта этилового и количественно с помощью 5 мл того же спирта переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем раствора доводят спиртом до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Содержание суммы нафтохинонов в БАД ВЕНОСПАС в пересчете на юглон (Х) в процентах рассчитывают по формуле:

x =

D × 25 × a₀ × 1 × K × 100

D₀ × a × 25 × 10

где D – оптическая плотность испытуемого раствора;
D₀ – оптическая плотность стандартного раствора Б;
a – навеска сырья, г;
a₀ – навеска юглона, г;
К – коэффициент разведения испытуемого раствора;
W – влажность сырья, %.

Результаты анализа сырья и БАД, обработанные методом вариационной статистики, представлены в таблице.

Объект исследования

△, x

ϵ, %

Околоплодники ореха черного

0,1930

0,95

30,35 × 10^-4

0,0078

4,04

Листья ореха черного

0,2352

0,95

35,41 × 10^-4

0,0091

3,87

СМЕСЬ ЛРС, используемая для БАД «Веноспас»

0,0421

0,95

7,393 × 10^-4

0,0019

4,51

БАД «Веноспас»

0,0206

0,95

2,335 × 10^-4

0,0006

2,91

Из полученных данных видно, что ошибка определения во всех случаях не превышает 5 %. Это является допустимым уровнем отклонения для использованного метода и позволяет считать разработанные методики пригодными для стандартизации сырья и фитопрепаратов ореха черного.

Вывод

Разработана методика количественного определения содержания суммы нафтохинонов в сырье ореха черного и получаемых на его основе фитопрепаратов.